时间线设定在《疾速追杀3》与《疾速追杀4》之间，少女伊芙·马卡罗（安娜·德·阿玛斯 饰）目睹父亲哈维尔（大卫·卡斯塔尼达 饰）被刺客组织“教团”杀害。哈维尔隶属白俄刺客组织“鲁斯卡·罗玛”，因背叛教团带伊芙逃亡而丧命。伊芙被纽约大陆酒店老板温斯顿（伊恩·麦柯肖恩 饰）送至鲁斯卡·罗玛，接受总监（安杰丽卡·休斯顿 饰）12年的芭蕾与杀手训练，化身顶级女杀手，踏上复仇之路。

伊芙的首项任务是保护韩国女孩秀英（崔秀英 饰），却发现教团首领（加布里埃尔·伯恩 饰）与杀父仇人有关。她暗中搜集线索，孤身对抗教团的围剿，结识神秘佣兵（诺曼·瑞杜斯 饰）与武术家郑斗洪（郑斗洪 饰）。教团派传奇杀手约翰·威克（基努·里维斯 饰）追杀伊芙，二人展开激烈交锋。大陆酒店前台卡戎（兰斯·莱迪克 饰）暗中协助伊芙，揭露温斯顿的隐秘动机。

伊芙在巴黎街头与地下黑市的枪战中杀出血路，芭蕾舞步与致命格斗交织，面对威克的追击与教团的背叛，她在血色舞台上完成复仇，揭开父亲死亡的真相，浴火重生为新世代“杀神”。